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基因诊断技术的质控指标

时间:2007-12-24  作者:microfox  阅读:13262次
      临床医生了解基因诊断质控指标的含义,对于合理地选择检测方法和正确地分析与解释结果有很大的价值。
1.灵敏度
  简单地说,灵敏度就是检测的最小值。一般来说,我们希望某一种检测技术的敏感度越高越好。理想地,病原体分离培养时能从待测标本中找到一个细菌或一个病毒颗粒或其他任何一个病原体;免疫学检测时,能测出一个抗原或抗体分子,等等,但这些通常都很难做到。然而基因检测则能达到这个理想境界,但在临床实践中,我们的确需要这么高的灵敏度吗?太高的灵敏度会对结果的可靠性带来什么影响呢?我们应当将这两个问题结合起来考虑,才能对某一检测项目的录敏度有一个正确的认识,不应一味追求高灵敏度。
2.精确性
   精确性就是真实性,我们希望任何一个检测技术的精确性越高越好,希望获得的结果是与患者的病情吻合的。但是精确性要受下述两个条件的制约:第一,技术本身可能存在的局限性。第二,实验室条件和操作技能。大家都知道PCR法最难克服就是假阳性的问题,实验室内产物污染会毁掉一个实验室,而恢复一个实验室的正常检测需要相当长的时间、做许多的工作和浪费大量的人力、物力。假阴性也同样给临床工作带来不便。
3.特异性
   特异性与精确性有一定关系,但不能与精确性混为一谈。假阳性率和假阴性率的高低是衡量基因检测技术特异性的两大指标。前面谈到的PCR产物污染所致的假阳性主要与实验室条件和操作技能有关,严格地讲与特异性高低的关系不大。特别性是由检测手段的内在因素决定的。决定基因检测的特异性的因素有以下几个:第二,待测目的基因的特异性。首先,生物体有一个完整的基因组,基因组内有各种基因,各有其功能,有些基因在同种、属的不同型和株之间有很高的同源性,甚至是完全相同的;而有些基因在不同种、属之间的同源性也很高,因此,我们在选择待测基因时应避开这些基因;其次,基因的保守性也很重要,选择非保守区基因极易产生假阴性;最后,即使是在保守区,也还存在保守程度的问题。第二,引物质量。这主要针对PCR技术而言。保证引物质量的主要因素之一,是保证其与基因扩增片段上的引物区完全结合,而且与基因组序列其他区域的同源性不得超过70%;其他比较重要的因素有引物的Tm值、引物长度,形成发夹结构和引物二聚体的能量值。第三,探针的制备。这是针对杂交技术而言的。如果是寡核苷酸探针,其设计要求基本同引物。制备较长探针时除了要考虑第一个因素外,还要考虑标记物的选择,比如不宜选择生物素标记探针作原位杂交,因为组织细胞中含有大量生物素,去除困难。第四,标本的准备。标本中的抑制物会干扰检测结果,造成假阳性或假阴性。第五,检测条件是否优化。这里不是指实验室条件,而是指检测试剂的组合、各种试剂最佳浓度的选择、杂交或扩增温度的优化、杂交或扩增时间的确定等。
4.可重复性
   它与精确性有关,但又不是完全由精确性所决定,因为可重复性的好坏牵涉到技术难度的问题。比如杂交法,看似简单,尤其是微反应板杂交,操作过程与酶联免疫技术相似,但难度要比酶联免疫技术大得多,检测者必须有一定的技能,至少原来对酶联免疫技术的检测过程比较熟悉,否则应当经过培训。PCR技术,尤其是逆转录PCR技术的应用,新手很容易失败。



参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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