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细胞学特殊染色

时间:2008-04-10  作者:丁伟  阅读:22497次

脂肪染色:     
苏旦Ⅲ 法
试剂配制:
苏旦Ⅲ 0.1-0.2g,
70% 酒精100 ml
将苏旦Ⅲ置于70%酒精中,加热饱和,在未冷前过滤,静置一夜。
染色步骤:
1. 细胞涂片。
2. 70%酒精固定1分钟。
3. 放入苏旦Ⅲ酒精溶液中20-30分钟。
4. 70%酒精洗去多余的染料。
5. 水洗。
6. 苏木素复染2-5分钟。
7. 1%盐酸酒精分化。
8. 水洗,蓝化,甘油封固。
结果:脂肪桔黄或红色。一般用于确定胞浆内空泡究竟是糖原,水变性还是脂滴。

苏丹Ⅳ(猩红)(Sudan Ⅳ)染色法:
试剂配制:
苏丹Ⅳ1-2克加纯酒精70ml,10%氢氧化钠20ml,蒸馏水10ml,制成混合液,略加热,置37℃温箱中1小时,取出冷却后过滤,12小时后即可使用。此液5天内失效,建议配制70%酒精饱和液。
染色步骤:
1.  细胞涂片。
2. 70%酒精固定1分钟。
3. 放入苏旦Ⅳ酒精溶液中20-30分钟。
4. 70%酒精洗去多余的染料。
5. 水洗。
6. 苏木素复染2-5分钟。
7. 1%盐酸酒精分化。
8. 水洗,蓝化,甘油封固。
结果:脂肪呈猩红色。

油红染色法:
试剂配制:
油红O 0.5g,异丙醇100ml,配成饱和液,长期保存备用。
油红稀释液的配制:取油红饱和液6毫升,加蒸馏水4毫升,静置5-10分钟后过滤后使用。
染色步骤:
1.细胞涂片。
2. 70%酒精固定1分钟。
3、蒸馏水洗。
4、油红稀释液染10-15分钟,避光、密封。
5、60%乙醇镜下分化至间质清晰。
6、水洗。
7、Marry氏苏木素复染核。
8、水洗。
9、甘油或甘油明胶封片。
结果:脂肪呈鲜红色,细胞核呈蓝色,间质无色。


糖原染色
过碘酸-Schiff(PAS)染色法
试剂配制:
碱性品红 1 g ,活性炭 2 g ,当量盐酸 20 ml ,偏重亚硫酸钠 1.5 g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
染色步骤:
1. 细胞涂片,95%酒精固定60分钟以上。
2. 1%过碘酸水溶液5-10分钟。
3. 蒸馏水洗多次。
4. Schiff液10-15分钟。
5. 0.5%偏重亚硫酸钠 (钾)水溶液洗2次(1-2分钟)
6. 流水冲洗10分钟。
7. 苏木素复染。(1-2分钟)
8. 酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。
结果:糖原红色。
 注意:1.阴性对照片用淀粉酶消化处理。
       2.糖原容易水解,取材标本最好新鲜,不要经过水洗。
       3.固定液用中性福尔马林为佳。
       4.如Schiff液发红, 再加入少量偏重亚硫酸钠,使液体颜色变清后又可使用.

粘液染色
阿尔辛蓝过碘酸雪夫(AB-PAS)染色法
试剂配制:
爱先蓝液: 爱先蓝8GX 1g ,蒸馏水 97 ml,冰醋酸 3 ml
核固红液: 核固红 0.1g,硫酸铝 5g,蒸馏水  97ml
碱性品红 1 g ,活性炭 2 g ,当量盐酸 20 ml ,偏重亚硫酸钠 1.5 g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200ml蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20ml。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
染色步骤:
1. 细胞涂片,95%酒精固定60分钟以上。
2、蒸馏水洗
3、3%冰醋酸浸5分钟
4. 爱先蓝液染10~20分钟
5. 蒸馏水洗
6. 1%过碘酸水溶液5-10分钟。
7. 蒸馏水洗多次。
8. Schiff液10-15分钟。
9. 自来水中浸10分钟(经常换水)。
10. 酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。
结果:中性粘液呈红色,酸性粘液物质呈蓝色。中性与酸性粘液的混合物质呈紫红色。

 Southgate胭脂红染色
试剂配制:
1.Southgate贮备液:胭脂红 1g,无水酒精 50ml,蒸馏水 50ml升,氢氧化铝 1 g,无水氯化铝 0.5 g
先将无水酒精和蒸馏水1:1混合,依次加入试剂,搅拌,水浴中煮沸3分钟,冷至室温过滤,并用50%酒精加至总量100ml,磨纱瓶冰箱保存。
2.Southgate稀释液:用前取10ml贮存液加蒸馏水40ml。
染色步骤:
1. 细胞涂片,95%酒精固定60分钟以上。
2. 苏木素染5~10分钟
3. 水洗,1%盐酸酒精分化
4. 水洗,蓝化
5、蒸馏水洗
6. Southgate稀释液染30分钟
7. 水洗
8. 95%酒精洗二次
9. 无水酒精脱水,透明,封固
结果:酸性粘液呈红色。

淀粉样蛋白
甲基紫法( Jurgens,1875)
试剂配制:
(1)1%甲基紫水溶液:甲基紫(methyl violet)1g,蒸馏水加至100ml
(2)1%蜡酸水溶液:冰醋酸1ml,蒸馏水99ml
操作方法:
1. 细胞涂片,95%酒精固定60分钟以上。
2、蒸馏水洗
3、1%甲基紫水溶液染3-5分钟。
4、水洗,在镜下观察。
5、1%蜡酸水溶液分化,直至见淀粉样蛋白呈紫红色或红色,胞核呈蓝紫色。
6、流水稍冲洗。
用阿拉伯树胶封片。或把涂片自然凉干后,用中性树胶封固。
结果:淀粉样蛋白呈紫红色至红色。
注意事项:
1、如无甲基紫,也可用结晶紫代替,同样可获得异色反应。
2、染好后的涂片不能用酒精脱水,因为此染料溶于酒精而立即脱色。
3、染好后的涂片也不宜用甘油明胶封盖。

二、甲醇刚果红法(改良的Highman)
(1)甲醇刚果红液:刚果红(congo red)0.5g,甲醇80ml,甘油20ml
(2)碱性酒精分化液:氢氧化钾0.2g,80%酒精100ml
操作方法:
1. 细胞涂片,95%酒精固定60分钟以上。
2、蒸馏水洗
3. 甲醇刚果红染液染10~20分钟
4. 用碱性乙醇分化液分化数秒
5. 水洗
6. 苏木素复染2分钟
7. 水洗数分钟
8. 脱水,透明,封固
结果:淀粉样物呈桔红色。

含铁血黄素
 普鲁士蓝反应:
试剂配制:
1. 2%亚铁氢化钾水溶液:   亚铁氢化钾 2 g ,蒸馏水 100 ml
2. 2%盐酸水溶液:   盐酸 2 ml,蒸馏水 98 ml
3. 0.1%沙红(safranine)溶液: 沙红 0.1 g, 蒸馏水 100 ml
   染色步骤:
1. 细胞涂片,95%酒精固定60分钟以上。
2、蒸馏水洗
3. 取2%亚铁氢化钾水溶液和2%盐酸水溶液等份混合,滴在涂片上,
   10~20分钟
4. 蒸馏水洗
5. 核复染
6. 水洗,脱水,透明,封固
结果:含铁血黄素呈蓝色。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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