返回首页
设为首页
加入收藏夹
进入病理技术论坛
首页 技术精华 病理资讯 同行交流 技术会诊 点滴经验 常规切片 特殊染色 免疫组化 分子病理 细胞园地 细胞制片 电镜技术 病理图库
 首页 > 特染染色 > 正文
神经组织

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:18562次

         尼氏体
一、缓冲亚甲蓝法( Pischingert法)

试剂配制:
(1)0.2N醋酸盐缓冲液,pH4.6
甲液:冰醋酸1.2ml,蒸馏水加至100ml
乙液:醋酸钠含3H2O 2.72g,蒸馏水加至100ml
两液等份混合后调pH至4.6。
(2)缓冲亚甲蓝染液:0.2N醋酸盐缓冲液,pH4.62ml,亚甲蓝0.064g,蒸馏水98ml
(3)4%钼酸铵液:钼酸铵4g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、切片脱蜡至水。
2、入缓冲亚甲蓝染液内染10分钟。
3、0.2N醋酸盐缓冲液(pH4.6)分化1-3分钟,在显微镜下观察。
4、4%钼酸铵液处理切片3-5分钟。
5、蒸馏水洗。
6、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:尼氏体染成鲜蓝色。

二、混合染色法
试剂配制:
(1)混合染色液:焦油紫10mg,硫堇10mg,亚甲蓝10ml,甲苯胺蓝10mg,蒸馏水100ml
(2)0.5%曙红酒精液:曙红Y0.5g,95%酒精加至100ml
操作方法:
1、切片脱蜡至水。
2、混合染色液染24小时。
3、蒸馏水稍洗。
4、用95%酒精分化,显微镜下控制。
5、入0.5%曙红酒精液复染数秒钟。
6、无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:尼氏体及核仁呈紫蓝色,其他组织红色。
注意事项:
1、用于尼氏体染色的组织要新鲜,固定迅速。否则,尼氏体可溶解而不易着染。
2、尼氏体的染色标本需避光保存,容易褪色。


          神经轴突
一、银浸镀法(Marsland,Glees和Erikson,1954)
试剂配制:
(1)0.5%火棉胶液:火棉胶片0.5g,无水酒精乙醚液(1:1)加至100ml,待火棉胶慢慢溶解混合均匀即可。
(2)20%硝酸银溶液:硝酸银20g,蒸馏水加至100ml
(3)Marsland氏银氨溶液:将20%硝酸银水溶液30ml以及无水酒精20ml混合,然后逐滴加入氢氧化铵,边滴边摇动,直至最初形成的沉淀刚好溶解,再加入氢氧化铵5滴,即可。
(3)5%硫代硫酸钠水溶液:硫代硫酸钠5g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、切片脱蜡至无水酒精。再入无水酒精乙醚(1:1)混合液稍洗。
2、入0.5%火棉胶液浸半分钟。
3、取出切片,抹去切片底面多余火棉胶液,稍干后将切片放入80%酒精10分钟。
4、蒸馏水浸洗。
5、放入预先加热至37℃的20%硝酸银液内30分钟。
6、蒸馏水速洗。
7、入10%中性甲醛液还原,共2次,每次10秒钟。
8、不用水洗,直接入Marsland氏银氨液作用30秒钟。
9、取出切片,抹去多余的银氨液,直接入10%中性甲醛液还原约1分钟。
10、蒸馏水冲洗,镜下观察。
11、5%硫代硫酸钠液处理1分钟。
12、流水冲洗。
13、经各级酒精脱水,再用无水酒精乙醚(1:1)除去火棉胶膜。
14、二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:神经轴突,树突呈棕黑色,背景淡棕色。

二、甘氨酸银浸镀法( Palmgren,1948)
试剂配制:
(1)酸性甲醛液:甲醛液25ml, 蒸馏水75ml,1%硝酸水溶液0.2ml
(2)5%甘氨酸水溶液:甘氨酸5g,蒸馏水加至100ml
(3)甘氨酸银溶液:硝酸银15g,硝酸钾10g,蒸馏水100ml,5%甘氨酸水溶液1ml
(4)还原液:焦性没食子酸(pyrogallol)1g,蒸馏水45ml,无水酒精55ml,1%硝酸水溶液0.2ml
配制完24小时后使用。
(5)氯化金水溶液:氯化金1g,蒸馏水200ml,冰醋酸0.2ml
(6)苯胺油酒精液:50%酒精100ml,苯胺油2滴
(7)5%硫代硫酸钠液:硫代硫酸钠5g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、切片脱蜡至水。
2、入酸性甲醛液于室温处理5-10分钟。
3、蒸馏水洗3次,每次约2分钟。
4、把切片置入甘氨酸银液于室温(20-25℃)作用15-30分钟,如果在37℃温箱内作用约需4-5分钟。
5、取出切片用滤纸吸干多余银液。
6、入预热45℃的还原液作用1分钟。将还原液在水浴中加热至45℃,立即插入切片,并轻轻摇动,当还原液有云雾状混浊时,更换新的还源液,约1分钟至无雾状出现,再持续半分钟。
7、用50%酒精洗切片5-10秒钟后,再用蒸馏水洗,镜下观察。如颜色仍淡可由第3步开始再重复一次,并减少在甘氨酸银液的浸镀时间,也可在还原液作用时的温度降底至37℃。
8、入氯化金水溶液数分钟,直到黄棕色脱去。
9、滴入苯胺油酒精液加强染色,约15秒钟。
10、流水冲洗切片。
11、5%硫代硫酸钠液处理1分钟。
12、流水冲洗。
13、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:神经纤维呈棕至黑色。


            神经髓鞘
 一、碳酸锂苏木素法(Loyez,1910)

试剂配制:
(1)La Manna氏铬化液:重铬酸钾9.5g,氯化锌4.5g,蒸馏水100ml
(2)4%硫酸铁铵水溶液:硫酸铁铵4g,蒸馏水加至100ml
(3)10%苏木素无水酒精液:苏木素10g,无水酒精加至100ml
用小口砂塞瓶盛装,混合溶解后放置2-3周成熟。
(4)碳酸锂苏木素染液:10%苏木素无水酒精液(成熟)10ml,碳酸锂饱和水溶液2ml,蒸馏水88ml
(5)Loyez氏分化液:四硼酸钠1g,铁氰化钾1.25g,蒸馏水100ml
操作方法:
1、组织固定于20%甲醛液或甲醛钙液,以不少于三天为宜。
2、入La Manna氏铬化液于37℃处理1-2天。
3、流水冲洗一晚。
4、常规脱水包埋,石蜡切片,厚约4-6μm。
5、切片脱蜡至水。
6、4%硫酸铁铵水溶液媒染12-24小时。
7、蒸馏水洗二次。
8、碳酸锂苏木素染液染12-24小时。
9、自来水洗去多余染液。
10、4%硫酸铁铵水溶液初步分化,并经常取出,蒸馏水洗,显微镜下观察,至其他组织呈淡灰黄色而髓鞘显示清晰为止。
11、自来水洗2分钟。
12、入Loyez氏分化液完成分化,约2分钟。
13、自来水充分洗。
14、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:髓鞘及红细胞呈深蓝色,其他组织淡黄色至灰黄色。
注意事项:
1、10%苏木素无水酒精溶液要提前配制,因配制后须经二、三个星期以上才成熟可用,因此需作为贮备液存放。
2、在用4%硫酸铁铵液分化时,要经常在镜下观察,不可分化过度,可改用2%硫酸铁铵水溶液分化。

二、砂罗铬花青法(改良的Page法,1965,1970)
试剂配制:
(1)10%硫酸铁铵水溶液:硫酸铁铵10g,蒸馏水加至100ml
(2)砂罗铬花青染液:砂罗铬花青R0.2g,蒸馏水96ml,10%硫酸铁铵水溶液4ml,浓硫酸0.5ml,依次溶解,充分混合,用小口砂塞瓶盛装室温保存。
(3)荧光桃红染液:荧光桃红B(phloxine B)0.5g,0.5%氯化钙水溶液100ml
操作方法:
1、组织固定于20%甲醛液,以不少于3天为宜,按常规脱水包埋,切片厚4-6μm。
2、切片脱蜡至水。
3、滴加砂罗铬花青染液于切片上,室温染15-20分钟。
4、倾去染液,流水冲洗1-2分钟。
5、10%硫酸铁铵水溶液分化1-5分钟,至胶原纤维和肌纤维接近无色或淡灰色,髓鞘呈清晰的蓝色为止,每次取出水洗后应在显微镜下观察控制。也可用4%硫酸铁铵液分化,但作用很慢,需要时间较长。
6、流水冲洗5-10分钟。
7、荧光桃红染液复染数秒钟。
8、水洗后各级酒精脱水。
9、二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:髓鞘呈鲜蓝色,红细胞深蓝色,神经细胞胞质,肌纤维及胶原纤维鲜红色。胞核和核仁蓝色。

 
           神经胶质细胞
氯化金升汞法( Gajal,1913)
试剂配制:
(1)溴甲醛液:溴化铵2g,甲醛液15ml,蒸馏水85ml
(2)氯化金升汞液:1%氯化金液10ml,二氯化汞0.5g,蒸馏水60ml
将二氯化汞溶于蒸馏水(可适当加温促使溶解),待稍冷加入氯化金液充分混合后过滤,本液在临用前配制。
(3)5%硫代硫酸钠液:硫代硫酸钠5g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、新鲜组织,厚3-5mm,固定于溴甲醛液2-5天。
2、流水冲洗20分钟,再用蒸馏水洗。
3、冰冻切片厚20-30μm。
4、蒸馏水洗3次,每次约数秒钟。
5、用玻璃钩小心将切片捞入氯化金升汞液于室温暗处镀染4-8小时,当切片呈紫红色时,即取一片置于载玻片放在显微镜下观察,在低倍镜下见星形细胞出现即可。
6、蒸馏水稍洗。
7、5%硫代硫酸钠液处理5分钟。
8、用自来自水充分洗涤数次,再用蒸馏水洗,并将切片贴在载玻片上,凉干,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:星形胶质细胞及其突起呈紫红色至紫黑色,神经细胞浅紫红色,神经纤维一般不着色。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
本栏目内容只供网友们学习研究用,不得用于商业行为。

【字体: 】【发表评论】【打印】【关闭
ico 论坛最新贴子
关于我们
  本站自1998年成立以来首次改版,从病理技术方面做全做深,新增了病理技术理论知识、病理资讯、病理图库及技术精英等功能。我们的宗旨是传播一种积极的思想,提供一些理论和实践的知识,为朋友们解决一点实际的问题,想您所想的,关心您关心的,希望病理技术网能成为全国病理工作者学习和交流的场所。
© Copyright 1998-2017 www.zhbljs.com,All Rights Reserved.
业务联系:DingWei(QQ:891232) 广告联系:CoastChen (QQ:37784) 技术支持:12900.COM