返回首页
设为首页
加入收藏夹
进入病理技术论坛
首页 技术精华 病理资讯 同行交流 技术会诊 点滴经验 常规切片 特殊染色 免疫组化 分子病理 细胞园地 细胞制片 电镜技术 病理图库
 首页 > 特染染色 > 正文
酶 类

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:17597次

         碱性磷酸酶
钙钴法(改良的Gomori法,1952)
试剂配制:
(1)碱性磷酸酶孵育液:2%β-甘油磷酸钠(sodiumβ-glycerophos-phate)2.5ml ,2%巴比妥钠2.5ml ,2%氯化钙4.5ml,2%硫酸镁0.2ml蒸馏水0.3ml依次混合后,pH值应为9.2-9.4。
(2)2%硝酸钴水溶液:硝酸钴(codalt nitrate)2g,蒸馏水加至100ml
(3)1%硫化铵水溶液:硫化铵1ml,蒸馏水99ml
操作方法:
A、冰冻切片法:
1、新鲜组织低温恒冷切片厚4-6μm,贴于玻片,风扇吹干后有冷丙酮固定10分钟。或组织用105甲醛钙于4℃冰箱固定12-18小时,冰冻切片,蒸馏水洗后贴于玻片上,风扇吹干。
2、入碱性磷酸酶孵育液(预热37℃)于37℃怛温箱孵育。
3、蒸馏水洗2-3次,每次1分钟。
4、2%硝酸钴水溶液作用5分钟。
5、蒸馏水洗2-3次,每次1分钟。
6、15硫化铵水溶液处理1分钟。
7、流水冲洗数分钟,再用蒸馏水洗。
8、阿拉伯糖胶封盖或常规脱水透明,中性树胶封固。
B、石蜡切片法:
1、新鲜组织取材2mm厚,用冷丙酮于4℃冰箱固定12-18小时。更换冷丙酮2次,每次约30-60分钟。
2、二甲苯透明2次(室温)。每次约30分钟。
3、浸蜡2-3次,每次约20-30分钟。(温度不要高于60℃)。
4、石蜡包埋。如不立即切片,蜡块放于4℃冰箱保存。
5、石蜡切片厚4-6μm,在37℃温水贴片。
6、在45℃温箱烧片1-2小时。
7、切片常规脱蜡至水。
8、入孵育液(预热至37℃)于37℃恒温箱孵育半至3小时或更长时间。
9、蒸馏水洗2-3次,每次1分钟。
10、2%硝酸钴水溶液作用5分钟。
11、蒸馏水洗2-3次,每次1分钟。
12、1%硫化铵水溶液处理1分钟。
13、流水冲洗数分钟,再用蒸馏水洗。
14、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:碱性磷酸酶活性处呈棕黑色沉淀。
对照方法:
1、另配一孵育液,其中省去β-甘油磷酸钠,改用等量的蒸馏水代替。
2、把切片先置入80-90℃的热水中处理10分钟,然后按上述孵育方法进行操作。
3、切片用Lugol氏碘液处理3分钟,5%硫代硫酸钠液处理1分钟,充分水洗后入孵育液。
经上述方法之一处理过的对照片应为阴性。

         酸性磷酸酶
硝酸铅法(根据Gomori法)
试剂配制:
(1)酸性磷酸酶孵育液:巴比妥醋酸缓冲液(pH5.0)10ml,硝酸铅(lead nitrare)12mg,3%β-甘油磷酸钠(sodiumβ-glycerop-hosp hate)1ml,先把硝酸铅溶于巴比妥醋酸缓冲液(pH5.0),然后加入β-甘油磷酸钠,混合后过滤,调pH值至pH5.0
操作方法:
1、新鲜组织低温恒冷片厚6μm,冷丙酮固定10分钟。
2、把切片置入酸性磷酸酶孵育液(预热至37℃),37℃孵育0.5- 2小时。
3、蒸馏水洗3次,每次1分钟。
4、1%冰醋酸液略洗。
5、蒸馏水浸洗2次。
6、1%硫化铵液处理1分钟。
7、流水冲洗数分钟,再用蒸馏水洗。
8、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:酸性磷酸酶活性处呈棕黄至棕褐色。

           三磷酸腺苷酶
钙激活法(1973)

试剂配制:
(1)碱性前孵育液(pH10.0): 0.1M巴比妥钠2ml,0.18M氯化钙2ml,蒸馏6ml
(2)酸性前孵育液:0.2M醋酸盐缓冲液(pH4.6)10ml
(3)底物孵育液(pH9.4):0.1M巴比妥钠2ml,0.18M氯化钙1ml,蒸馏水7ml,三磷酸腺苷二钠盐(adenosine-5′-triphosphate,disodium)25mg,调pH至9.4。
操作方法:
1、新鲜组织低温恒冷切片厚6μm,分别贴于2张玻片上,风扇吹干。
2、取一张切片,于碱性前孵育液(pH10.0)室温孵育15分钟。
3、取另一张切片,入酸性前孵育液(pH4.6)室温孵育5分钟,然后再入碱性前孵育液(pH10.0)洗30秒钟。
4、将上述二张切睛入底物孵育液(pH9.4)于室温孵育30-45分钟。
5、1%氯化钙液浸洗3次,每次约3分钟。
6、2%氯化钴液处理3分钟。
7、于0.01M巴比妥钠液充分洗4-5次。
8、流水冲洗1分钟,蒸馏水洗。
9、1%硫化铵液处理1分钟。
10、充分水洗。
11、常规脱水透明,中性树胶封固。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
本栏目内容只供网友们学习研究用,不得用于商业行为。

【字体: 】【发表评论】【打印】【关闭
ico 论坛最新贴子
关于我们
  本站自1998年成立以来首次改版,从病理技术方面做全做深,新增了病理技术理论知识、病理资讯、病理图库及技术精英等功能。我们的宗旨是传播一种积极的思想,提供一些理论和实践的知识,为朋友们解决一点实际的问题,想您所想的,关心您关心的,希望病理技术网能成为全国病理工作者学习和交流的场所。
© Copyright 1998-2017 www.zhbljs.com,All Rights Reserved.
业务联系:DingWei(QQ:891232) 广告联系:CoastChen (QQ:37784) 技术支持:12900.COM