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免疫荧光细胞化学

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:18982次

  免疫荧光细胞化学是先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜观察,细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上的荧光素受激发光的照射发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以观察到荧光所在的细胞或组织内的位置,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及利用定量测量技术测定含量。
一、直接方法
(一)检查抗原方法
这是最简便、快速的方法,用已知特异性抗体与荧光素结合,制成特异性荧光抗体。直接用于细胞或组织抗原的检查,此法特异性高,敏感性较差,一种荧光抗体只能检查一种抗原,常用于肾穿和病原体检查。
(二)检查抗体方法
将抗原标记上荧光素,即为荧光抗原,用此荧光抗原与细胞或组织内相应抗体反应,将抗体在原位检测出来。
二、间接方法
(一)检查抗体方法
此法是先用特异性抗原与细胞或组织内抗体反应,再用此抗原的特异性荧光抗体与结合在细胞内抗体上的抗原相结合。
(二)检查抗体方法
用已知抗原细胞或组织标本的切片,加上待检血清,如果其中含有切片中某种抗原的抗体,抗体结合在抗原上,再用间接荧光抗体(这种属特异性IgG荧光抗体)与结合在抗原上的抗体反应(如检测人血清中的抗体必须用抗人IgG)荧光抗体等,在荧光显微镜上可见抗原抗体反应部位呈现明亮的特异性荧光。此法是常规检验血清中自身抗体和多种病原体抗体的重要手段。
三、检查抗原法(间接法)
此法是直接法的改进,先用特异性(对细胞或组织内抗原)抗体(或称第一抗体)与细胞标本反应,随后用缓冲盐水洗去未与抗原结合的抗体,再用间接荧光抗体(也称第二抗体,种特异性)与结合在抗原上的抗体(是第二抗体的抗原)结合,形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。由于结合在抗原体复合物上的荧光抗体显著多于直接法,从而提高了敏感性。

            直接免疫荧光法
1、 冰冻切片6~8微米
2、 放入TBS内轻洗1 分钟
3、 滴加荧光抗体(37 ℃,60分钟)
4、 蒸馏水轻洗1分钟,(三道)
5、 甘油封固。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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