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免疫组化在胸腹水脱落细胞学中的应用

时间:2007-12-24  作者:丁伟  阅读:17691次

       胸腹水脱落细胞学是一个传统而方便的病理学检查,由于缺少组织学结构,常常需要采取辅助的手段,才能作出正确的诊断,特别是免疫组织化学的方法的应用。现将方法介绍如下:
一、制片
1、取液:轻轻的把送检液体上部倒掉,取下层液体,放入离心管。
2、转速3000/分,2分钟。
3、看沉淀物的量的多少区别对待:
(1)量少:快速倒去液体,将试管竖直倒立于卫生纸上,吸干管口的水分,用吸管吸出沉淀物。如果沉淀物太少,可将液体倒去后再加入送检标本,重复离心,反复多次。倒去上清液,把试管口向上静置几秒,试管壁上的剩余液体会流入管底,用吸管反复抽吸,把管底的细胞全部洗刷到液体里,然后全部吸出,放入0.5或1ml的尖底离心管内,重新离心,离心完成后,用200微升加样枪吸取上清液,最后用加样枪吸出沉淀物,以同心圆顺时针方向,将沉淀涂开,面积越小越好。
(2)量多:用吸管吸掉上清液,然后,用吸管吸取沉淀物上层细胞。
(3)血多的标本处理:吸取上层沉淀物,放入25%酒精冰醋酸液内(25%酒精90ml加10ml冰醋酸),打匀,再离心沉淀。然后,吸取沉淀物。
4、涂片:吸取沉淀物后,滴在玻片上,可采用二张玻片对拉法,也可用吸管涂拉,最好是采用玻片推拉法(玻片与玻片之间角度为5度左右。吸取沉淀物涂片的关键:吸取沉淀物内不能带有水分。
5、固定:也是制片的关键。当细胞涂片完成后,应立即放入95%酒精液体内固定,至于固定液:如甲醇、酒精乙醚液等效果无明显差异。细胞的褪变主要原因不是固定液的种类,而是在制片过程中空气的氧化过程:干燥。固定时间:30分钟。剩下的送检液体不要立即倒去,等阅片完成后,根据需要再制片做免疫组化或制成组织块后再处理。(可放在冰箱内,也可放在室温状态下24小时左右)

二、免疫组化步骤
1、0.5%甲醇双氧水阻断,10-20分钟
2、双蒸水洗数次
3、用pH7.6PBS/Triton100 ( 0.05% )浸洗数分钟
4、加一抗室温孵育60分钟
5、 pH7.6PBS /Triton100 (0.05%)液浸洗数分钟
6、加非生物素试剂盒二抗(时间按说明书)
7、pH7.6PBS洗三次
8、DAB显色。
9、水洗,苏木素复染,脱水封片。

三、胸腹水脱落细胞学免疫组化关键
1、去除红细胞。
2、适当的甲醇双氧水浓度和阻断时间。
3、一抗孵育后洗涤要干净。
4、选择低背景、高敏感度的试剂盒:    
    Envison+R  PV9000  EliVisionTMplus
5、尽可能用细胞切片做免疫组化。

四、细胞切片的制作:
      按常规离心,沉淀。倒去上清液,加入4%戊二醛,与沉淀物混匀,固定一小时,离心,将上清液倒去,加入95%酒精一个小时,沉淀物会凝聚成团,脱离管壁,取出后直接放入脱水盒,从85%酒精开始按常规组织脱水、包埋、切片。

五、抗体的应用:
1、推断原发部位
肝癌 AFP,Hep
肺癌 TTF-1,SPA
消化道癌 CA19-9
前列腺癌 PSA
绒毛膜上皮癌 HCG
甲状腺癌 TTF-1、TG
卵巢浆液腺肿瘤 CA125

2、判断类型
神经内分泌癌 CGA Syn
恶性黑色素瘤  S-100  HMB-45  Melanin-A  NSE
何杰金氏淋巴瘤 LCA、CD30、 ALK
非何杰金氏淋巴瘤  LCA、CD45RO、CD3、CD79a、CD20
鳞癌 CK10、13、14、15、16、17, CK(H)
腺癌 CK7 CK8 CK18 CK19 CK20  CK(L)
间皮 Calreinin  MesothelialCell CK5/6

六、结论
    胸腹水中细胞成分复杂,细胞类型繁多,加上制片过程中人为的假象,容易导致误诊和漏诊。所以必须要有优质的片子,仔细的观察,合理的应用免疫组化和特殊染色,综合的分析,才能做出正确的诊断。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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