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浅谈术中快速标本的标准化石蜡制片固定技术的应用

浅谈术中快速标本的标准化石蜡制片固定技术的应用

随着外科手术技术的发展,患者与日俱增,切除的病灶在逐渐缩小,术中快速病理诊断要求在不断提高,不仅要求明确病变性质,还要求明确手术断端及淋巴结转移等情况进行快速病理诊断,来确定手术范围,更正手术方案。为了术中短时间内做出正确的病理诊断,术中患者体内病灶一取出立刻送至病理科,有些病灶如肺结节、脑肿瘤等新鲜标本量少而必须全埋速冻,制成高质量冷冻切片,是提高快速病理诊断质量的前提;后续解冻后再制成石蜡切片,做免疫组化、分子检测,进一步做出精准的常规病理诊断,为患者的精准医疗提供依据。经过多年的实践,不断学习改进,总结出术中快速标本的标准化石蜡制片固定技术,现介绍如下。
术中快速标本的标准化石蜡制片固定技术包含三个步骤:
1. 快速标本取材的“标准化”:手术中从患者体内取出病灶开始,送达病理科,再取材为待冷冻标本,平均耗时约10min这一步骤先后分2个环节:a.术中离体的新鲜组织由手术室专人负责装入标本袋,填写病理申请单,再从专用手术电梯直达病理科冷冻快速室,约耗时5minb.病理人经过“三查七对”后,切除周边脂肪、毛发、硬骨或钙化物,及线结、钉子等异物,取下最具代表性的新鲜组织用作待冷冻标本,其长度小于3.0cm,由于冷冻托的最大直径是3.8cm,标本边缘留胶,特别是在入刀侧要保留出足够的面积,利于毛笔拉片,拉片部位不碰到标本,以免污染;其宽度小于2.0cm,取决于盖玻片的宽度是2.4cm,四周边缘留出空间利于镜下阅片;其最佳厚度是0.3cm,特别是脑组织厚度0.2-0.3cm,冷冻切片冰晶形成很少。待冷冻标本的标准三维是3.0×2.0×0.3cm约耗时5min
2. 冷冻制片的“标准化”:从3min(包埋、速冻、切片)→3min(染色前固定、HE染色、封片、贴标签)→5min(镜下阅片出报告、固定冻后标本),该步骤平均耗时约11min。待冻标本放在冷冻托上,在标本及四周滴加胶水速冻成硬块,切片力度适中、揺速均衡,先粗修暴露最大面,再细切光滑细腻,切出厚薄均匀完整的6μm切片(淋巴结标本的切片厚度是4μm效果好),HE染完封片,核对无误后出片。诊断组镜下阅片,病理结果致电手术室,技术员从冷冻切片机内取出冷冻标本,室温下解冻,也可放在一只手的掌心中,用另一只手的大鱼际捂住冷冻标本,10s左右胶水呈半透明状,即可取下放入对应的包埋盒中为冻后标本,立刻置入10%中性福尔马林固定液中浸泡。
3. 冷冻制片后处理的“标准化”:每天术中快速病理诊断工作一结束,当天冻后标本等所有快速取材标本,按病理号顺序整齐排列,确认无误后,全部移入5.5L的塑料密封盒中,包埋盒数量≤150个,倒入2500ml/桶的10%中性福尔马林固定液;包埋盒数量>150个,倒入25000ml10%中性福尔马林固定液,及时进行完全充分的下班后固定,第二天与常规取材标本一起进行组织处理,第三天制成石蜡切片、常规HE染色,根据需要再进行IHC染色及分子病理检测。
组织离体后,在1h内固定,几乎保持其生活状态时的形态结构及位置,最大程度的保存抗原、DNA等物质。有特殊要求的如检测Her2应在30min内固定。做免疫组化、分子病理的标本(厚度2-3mm),总固定时间需要24-48h。显而易见,术中快速标本进行标准化石蜡固定技术,确保了术中新鲜标本平均在21min内完成冷冻制片及冻后固定;而且当天快速诊断工作结束后,所有术中快速标本,再在新鲜足量的10%中性福尔马林固定液中继续有效固24h,是后续所有工作的质量保障,值得推广。病理是医学的灵魂,一旦病理人团结起来的时候,有谁能抵挡她捍卫“医学之本”的使命。

[ 本帖最后由 shyf 于 2022-5-25 00:10 编辑 ]

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这个只能在标本量很小的单位才有可能做,我们每天有100来例,光冰冻就做到半夜,这么大的量来做这个就不可能了,而且新鲜组织取材最大问题是很难切平整,厚薄不容易控制。组织也容易粘在包埋盒上。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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