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原帖由 taofseu 于 2006-11-16 13:12 发表
版主，我现在做大鼠变应性鼻炎模型鼻粘膜中蛋白A的免疫组化，现在国内外没有找到别人报道过，由于经费不够，所以没有没有用ELISA，预实验发现正常组和患病组都有着色（EnVision二步法），问题是：
1、阳性对照和 ...

版主，楼上用英文的不是我啊，可以回答我的问题吗？谢谢了

不好意思，单位的电脑没中文输入；我是‘身在曹营，心在汉’，上班开小差上网充充电，所以这里还要多谢各位老师写出这么精彩的专业技术指南，谢谢！

我像很多这个论坛的朋友一样是半路转行的，对病理还是门外汉，汗。。。我上面的那个问题是想向斑竹请教：同型抗体用在此处的作用是什么？希望斑竹不吝惜多讲几句给我们这些入门者，谢谢！

我以前做了一点药物动力学的东东（受体配体结合），所以可能问得风牛马不相及，再汗。。。天咋又热了。我想说的是，还是借用药动说事比较清楚：1。配体A和配体B竞争同一个受体；A有标记，B没有；当B多过A时，A被阻断；得出的背景叫做非特异性结合；2。A结合受体甲乙丙丁，B结合乙丙丁；同样A有标记，B没有；在没有特异性甲配体存在时可以用A＋B＝甲，因为乙丙丁被B阻断了。

好啦，我的问题说完了。在斑竹说的这种技术中一抗－比方说抗－甲抗原，是IgG2亚型，加入IgG2同型抗体，我姑且认为这个IgG2抗体是什么都抗，比方说甲乙丙丁戊，来者不拒，那就符合情形1，二者竞争，只是看各自的Ki值决定结合力了；但是二抗呢？二抗抗IgG2, 那就不分敌我什么都结合了，结果是甲乙丙丁戊都假阳性；或者，这个IgG2同型抗体也特意结合甲，但是被人做了手脚，不被二抗识别，也就起到了1中提到的阻断效果。

不知道那一个情形比较接近事实，还是统统错，呵呵，我不介意啦，只要斑竹解出迷题，再次替所有的入门者感谢斑竹！

使用相同的血清能够封闭非特异性的抗原，减少假阳性，减轻非特异背景．阴性对照是针对假阳性，

我们很多概念没有统一，很多问题没有搞清楚，比如１０的福而马林和甲醛，很多人没有搞清楚

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原帖由 folksmile 于 2006-11-21 21:36 发表
不好意思，单位的电脑没中文输入；我是‘身在曹营，心在汉’，上班开小差上网充充电，所以这里还要多谢各位老师写出这么精彩的专业技术指南，谢谢！

我像很多这个论坛的朋友一样是半路转行的，对病理还是门外汉 ...

我知道,你是‘身在美营. 心在汉?’

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原帖由 folksmile 于 2006-11-21 22:07 发表
我以前做了一点药物动力学的东东（受体配体结合），所以可能问得风牛马不相及，再汗。。。天咋又热了。我想说的是，还是借用药动说事比较清楚：1。配体A和配体B竞争同一个受体；A有标记，B没有；当B多过A时，A被阻断；得出的背景叫做非特异性结合；2。A结合受体甲乙丙丁，B结合乙丙丁；同样A有标记，B没有；在没有特异性甲配体存在时可以用A＋B＝甲，因为乙丙丁被B阻断了。

A＋B＝甲, 要看 A, B的浓度.
当B多过A许多倍时,A＋B＝甲.

引用:

原帖由 folksmile 于 2006-11-21 22:07 发表
好啦，我的问题说完了。在斑竹说的这种技术中一抗－比方说抗－甲抗原，是IgG2亚型，加入IgG2同型抗体，我姑且认为这个IgG2抗体是什么都抗，比方说甲乙丙丁戊，来者不拒，那就符合情形1，二者竞争，只是看各自的Ki值决定结合力了；但是二抗呢？二抗抗IgG2, 那就不分敌我什么都结合了，结果是甲乙丙丁戊都假阳性；或者，这个IgG2同型抗体也特意结合甲，但是被人做了手脚，不被二抗识别，也就起到了1中提到的阻断效果。

看样子你没有完全理解.
我们这里讨论的在免疫组化中设立阴性对照，isotype control------阴性对照. 在阴性对照片里它的一抗是isotype control reagent.  如果一抗的亚型是小鼠（mouse) IgG2a, 阴性对照片里它的一抗就用小鼠（mouse) IgG2a isotype control reagent（有专门的同型对照试剂买）来代替原来的一抗。isotype control reagent（同型对照试剂）不因该与组织中的任何细胞反应。所以及施加了二抗抗IgG2也不会有假阳性。

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原帖由 folksmile 于 2006-11-21 22:07 发表
再汗。。。天咋又热了。

您是在 San Diego?

不是了，谢谢了，明白了。（：