版主上次建议不要用石蜡切片做荧光免疫标记，主要因为可参考的资料很少，仅有的资料上也是用的石蜡荧光标记，并且研究的都是贮藏蛋白，只是材料不同而已，他们做出来了，所以我也按照他们的技术路线来的，初次做免疫组化很多不懂的，请版主多给点建议。我要定位的是液泡蛋白质，如果改用酶标—DAB法的话，是不是还要进行复染才能看清楚被标记的物质所在的部位呀，用什么复染，请版主不吝赐教哦！

石蜡切片会有较强的自发荧光，所以避免用它来做免疫荧光。
用酶标—DAB法最要复染。复染的目的是更加清晰的辨别阳性的位置。一般用苏木素染一下细胞核就可以了。

版主说的是，我在镜下观察到一些含单宁类物质的细胞自发荧光很强，对标记上FITC的目的蛋白发出的荧光有干扰，不过我觉得不太影响结果的判断，因为两类细胞区别很明显，如果适当改善下，比如提高二抗浓度，增强目的蛋白荧光信号可能会好些（个人观点）。谢谢版主建议！

引用:

原帖由 shanghainese 于 2007-4-5 10:47 发表
石蜡切片会有较强的自发荧光，所以避免用它来做免疫荧光。
用酶标—DAB法最要复染。复染的目的是更加清晰的辨别阳性的位置。一般用苏木素染一下细胞核就可以了。

版主好：
      石蜡切片做免疫荧光确实有较强的自发荧光，之前拿一个片子试了一下，液泡蛋白中确实有荧光发出，但信号弱，周围一些物质自发荧光信号很强。目的蛋白荧光弱猜想可能是由于H2O2配制（浓度太低）出了问题，而且没有设置对照，所以不好下结论。
      后来又试了一次，用免疫前血清做了对照，H2O2按照版主给的配法（30%H2O2 10ml和80% 90ml甲醇溶液），二抗上次配的没用完继续用，结果出来荧光信号是强了，但对照片子中液泡蛋白质也发出了荧光，两组片子几乎没有区别，不知是什么原因（操作步骤没有问题）。是不是对照不能用免疫前血清（与自制的多克隆抗体不是同一只兔子）啊，还是这种液泡蛋白质本身有自发荧光。如果是后者的话，用酶标—DAB法是否能消除这种影响呢。
      还有个问题请教版主，我也准备做胶体金免疫电镜定位，对实验器皿有特殊要求吗？如果一抗二抗抚育结束，醋酸铀柠檬酸铅染完色不能及时观察的话（电镜室的老师挺忙的）暂时4度冰箱保存对观察结果影响大吗？
      请版主指点迷津，急啊！

不要用 石蜡切片做免疫荧光。