版主好：
      石蜡切片做免疫荧光确实有较强的自发荧光，之前拿一个片子试了一下，液泡蛋白中确实有荧光发出，但信号弱，周围一些物质自发荧光信号很强。目的蛋白荧光弱猜想可能是由于H2O2配制（浓度太低）出了问题，而且没有设置对照，所以不好下结论。
      后来又试了一次，用免疫前血清做了对照，H2O2按照版主给的配法（30%H2O2 10ml和80% 90ml甲醇溶液），二抗上次配的没用完继续用，结果出来荧光信号是强了，但对照片子中液泡蛋白质也发出了荧光，两组片子几乎没有区别，不知是什么原因（操作步骤没有问题）。是不是对照不能用免疫前血清（与自制的多克隆抗体不是同一只兔子）啊，还是这种液泡蛋白质本身有自发荧光。如果是后者的话，用酶标—DAB法是否能消除这种影响呢。
      还有个问题请教版主，我也准备做胶体金免疫电镜定位，对实验器皿有特殊要求吗？如果一抗二抗抚育结束，醋酸铀柠檬酸铅染完色不能及时观察的话（电镜室的老师挺忙的）暂时4度冰箱保存对观察结果影响大吗？
      请版主指点迷津，急啊！

不要用 石蜡切片做免疫荧光。

引用:

原帖由 shanghainese 于 2007-4-9 01:48 发表
不要用 石蜡切片做免疫荧光。

在开展实验之前，我心里就没底，不知会出什么结果，不过既然做了，还是尽可能的想知道问题出在哪里，版主能否帮学生分析下问题存在的最可能原因，先谢了

原因已经告诉您了，那是自发荧光。
办法也告诉您了，那就是不要用石蜡切片做免疫荧光。

谢谢版主，我会试试辣根过氧化物酶标法，有问题再向版主请教