各位老师：
     学生正做免疫组化，总是脱片，好好的两排材料染色结束后就剩下一两片，而且结构也不完整了。玻片事前用APES处理过，怕不保险，用前又加涂了一层普通粘片剂，参考一些资料说为保存抗原，切片后60度只烘了半小时就装盒放4度冰箱了。脱蜡前又在60度烤片1小时，脱蜡至水的过程好好的，一点不脱片，一入3%H2O2就出现脱片了，抗原修复（微波修复，高中挡8分钟，间歇5分钟后再中低档5分钟）后就不剩几个了，抚育过程也万分小心，清洗也没敢摇晃，最后实验结束经常就只有不完整的一两片了。总有种前功尽弃的感觉，还好染色结果还可以。
      所有样品都已经这样处理了，不可能再重新切片了，请教各位高手像这种情况有没有什么急救措施？
      不知脱蜡前加长烤片时间，如37度过夜，次日再60度1-2小时能否解决脱片问题，同时对抗原影响又不大呢？

感觉冰箱拿出来的片子会出水雾，但是石蜡的会不会脱片就不知道了，我们做的冰冻一点也不脱，不过我们用的是polylysine，呵呵；60度多烤烤，下次记得时间是最值钱的，买防脱片吧，当然我是说自己处理有问题解决不了时，不主张浪费的。

谢谢folksmile，呵呵 没时间也没机会再做了，今年要毕业啊，只能以后师弟师妹做告诫他们啦。我片子42度过夜了，第二天又60度2小时，不知这次结果怎样，只能试试了

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原帖由 wuqingxia 于 2007-4-18 09:10 发表
谢谢folksmile，呵呵 没时间也没机会再做了，今年要毕业啊，只能以后师弟师妹做告诫他们啦。我片子42度过夜了，第二天又60度2小时，不知这次结果怎样，只能试试了

我试了42度过夜，之后60度2小时，这次脱片更厉害啊，听天由命了，现在还只进行到封闭液，离最后结束还有好多步骤呢，估计没片了都要，真郁闷啊，不知怎么办好了，

恩...这种情况是很郁闷；不知道你切的是什么材料，有没有要求连续性？如果联系性要求不高，也就是说每一个section都是一样的就没问题的，因为只要最后一组有一个section幸存就ok了，

呵呵 我硕士三年级，你说的是，有结果就行，要求不高。我用的是植物材料银杏的枝条，没要求一定要连续。
      再请教个问题，我的封闭液是含5%脱脂奶粉、0.2%Tween20的TBS，请问室温20度左右封闭一个小时是否时间太长了，你一般用多长时间的？

我是用37度过夜，石蜡切片不脱片